הידע המיקרוביאלי שאתה רוצה
מיקרואורגניזמים הם קבוצה של אורגניזמים זעירים הקיימים בטבע רבים ואינם נראים לעין בלתי מזוינת ויש להגדיל אותם מאות, אלפי או אפילו עשרות אלפי פעמים בעזרת מיקרוסקופ אופטי או מיקרוסקופ אלקטרונים. יש להם את היתרונות של גודל קטן, מבנה פשוט, רבייה מהירה, וריאציה קלה ויכולת חזקה להסתגל לסביבה.
סיווג מיקרואורגניזמים:
ישנם סוגים רבים של מיקרואורגניזמים, לפחות יותר מ-100,000 סוגים. על פי המבנה שלהם, ניתן לחלק את ההרכב הכימי והרגלי החיים והבדלים נוספים לשלוש קטגוריות.
לגרעין תא מיקרוביאלי אוקריוטי יש דרגה גבוהה יותר של התמיינות, כולל קרום גרעיני, גרעין וכרומוזומים; לציטופלזמה יש אברונים שלמים (כגון רטיקולום אנדופלזמי, ריבוזום ומיטוכונדריה וכו'). פטריות שייכות לסוג זה של מיקרואורגניזם.
לתאים מיקרוביאליים פרוקריוטיים יש מידה נמוכה של התמיינות גרעינית, רק נוקלאופלזמה פרימיטיבית, ללא קרום גרעיני וגרעין; האברונים אינם שלמים במיוחד. ישנם מינים רבים של מיקרואורגניזמים כאלה, כולל חיידקים, ספירוצטים, מיקופלזמה, ריקטסיה, כלמידיה ואקטינומיציטים.
למיקרואורגניזמים תאיים אין מבנה תא טיפוסי ואין מערכת אנזימים לייצור אנרגיה, והם יכולים לגדול ולהתרבות רק בתאים חיים. וירוסים שייכים לסוג זה של מיקרואורגניזם.
הפרדה וטיהור של מיקרואורגניזמים
תרבית מיקרוביאלית המכילה יותר ממין אחד נקראת תרבות מעורבת. אם כל התאים במושבה נגזרים מתא הורה אחד, אז המושבה נקראת תרבות טהורה. בזיהוי מיני חיידקים, המיקרואורגניזמים המשמשים נדרשים בדרך כלל להיות תרביות טהורות. תהליך קבלת התרבות הטהורה נקרא הפרדה וטיהור, וישנן שיטות רבות.
1. שיטת צלחת יוצקים
תחילה, תרחיף החיידקים מדולל בסדרה, וכמות מסוימת מהדילול מעורבבת במלואה עם מדיום האגר התזונתי המומס שנשמר בערך ב-40-50 מעלות, ולאחר מכן יוצקים את התערובת לצלחת פטרי סטרילית. לאחר התמצקות, הצלחת הודגרה הפוך בתא קבוע. תא בודד מוכפל ליצירת מושבה, מושבה בודדת נלקחת ליצירת תרחיף, וחוזרים על השלבים לעיל מספר פעמים לקבלת תרבית טהורה.
2. שיטת ציפוי פלטה שטוחה
ראשית, תרחיף החיידקים מדולל כראוי, וכמות מסוימת מהדילול מונחת על צלחת אגר תזונתית סטרילית שהתמצקה, ולאחר מכן הדילול מתפזר באופן שווה על פני המדיום בעזרת מרית זכוכית סטרילית. ניתן להשיג מושבה בודדת על ידי דגירה בטמפרטורה קבועה.
3. שיטת כרטסת צלחות
הדרך הקלה ביותר לבודד מיקרואורגניזמים היא פסים. משטחים כמות קטנה מהתרבית על הצלחת באמצעות לולאה סטרילית. ישנן שיטות רבות לכתיבה. שיטות השרטוט הנפוצות שסביר יותר להופיע במושבה בודדת הן שיטת האלכסון, שיטת העקומות, שיטת הריבוע, שיטת הקרינה ושיטת ארבע הרשתות. כאשר לולאת החיסון נעה אחורה על פני המדיום, נוזל החיידק על לולאת החיסון מדולל בהדרגה, ולבסוף תא בודד מפוזר על הקו המצויר. לאחר התרבית, כל תא גדל למושבה.
4. שיטת תרבות העשרה
השיטה והעיקרון של שיטת תרבות העשרה הם פשוטים מאוד. אנו יכולים ליצור תנאים המאפשרים רק לחיידקים הרצויים לגדול, ובתנאים אלו החיידקים הרצויים יכולים להתחרות ביעילות בחיידקים אחרים ולעלות בהרבה על חיידקים אחרים מבחינת יכולת הצמיחה. אם יש לבודד טפילים מחייבים, יש לחסן את הדגימות לאוכלוסיות התאים המארח הרגישים המקבילים כדי לגדול במספרים גדולים. ניתן להשיג חיידקים טפילים טהורים על ידי זריעה חוזרת.
5. שיטה אנאירובית
במעבדה, על מנת לבודד כמה חיידקים אנאירוביים, ניתן להשתמש במבחנה המכילה את המדיום המקורי ככלי תרבית, ולחמם את המבחנה באמבט מים רותחים למשך מספר דקות כדי להוציא את החמצן המומס בתווך. . לאחר מכן הוא מקורר במהירות ומחסן. לאחר החיסון, הוסף פרפין סטרילי על פני המדיום כדי לבודד את המדיום מהאוויר. שיטה נוספת היא להחליף את הגז בתווך ב-N2 או CO2 לאחר החיסון, ולאחר מכן לאטום את הפתח של המבחנה על להבה. לפעמים על מנת לבודד כמה חיידקים אנאירוביים בצורה יעילה יותר, ניתן לחסן את הדגימה המבודדת על המדיום, ואז ניתן להניח את צלחת הפטרי במכשיר תרבית אנאירובי אטום לחלוטין.
6. שיטת בידוד של תא בודד (או נבג בודד).
זה לקחת שיטת microseparation כדי לבודד ישירות תאים בודדים או פרטים בודדים מאוכלוסיות מעורבות לתרבות כדי להשיג תרבות טהורה. עבור מיקרואורגניזמים גדולים יותר, ניתן לחלץ פרט בודד באמצעות נימי. עבור מיקרואורגניזמים עם פרטים קטנים יחסית, מיקרומניפולטור נדרש לקטוף תאים מיקרוביאליים בודדים או נבגים עם נימי או מיקרומחט, וו, לולאה וכו' מתחת למיקרוסקופ כדי להשיג תרבית טהורה. לשיטת הפרדת תא בודד יש דרישות גבוהות יחסית לטכנולוגיית הפעולה.
תרבות מיקרוביאלית
1. לפי האם יש צורך בחמצן במהלך התרבית, ניתן לחלק אותו לשתי קטגוריות: תרבית אירובית ותרבות אנאירובית.
תרבות אירובית: ידועה גם בשם "תרבות אירובית". כלומר, כאשר מגדלים את המיקרואורגניזם הזה, הוא צריך להוסיף חמצן, אחרת הוא לא יגדל טוב. במעבדה מתקבלות תרביות מלוכסנות על ידי קבלת אוויר סטרילי מבחוץ דרך פקקי כותנה. רוב התרבית הנוזלית בבקבוק ארלנמייר מנערת על ידי שייקר, כך שהאוויר החיצוני יכול להיכנס ללא הרף לבקבוק.
תרבות אנאירובית: ידועה גם בשם "תרבות אנאירובית". מיקרואורגניזמים כאלה אינם דורשים חמצן כדי להשתתף בגידול. בתהליך הגידול של מיקרואורגניזמים אנאירוביים, הנקודה החשובה ביותר היא להסיר את החמצן שבמדיום.
2. לפי המצב הפיזי של המדיום, ניתן לחלק אותו לשתי קטגוריות: תרבית מוצקה ותרבות נוזלית.
תרבית מוצקה: זוהי שיטה של חיסון הזנים לתוך תווך מוצק רופף ועשיר בחומרי הזנה, ולטפח מיקרואורגניזמים בתנאים מתאימים.
תרבית נוזלית: בניסויים, תרבית נוזלית יכולה לגרום למיקרואורגניזמים להתרבות במהירות ולקבל מספר רב של תרביות. בתנאים מסוימים, זוהי גם שיטה יעילה למיקרואורגניזמים לברור ולהעשיר חיידקים.
BKMAM biotech מספקת חומרים מתכלים מעבדתיים מתאימים לתרבית חיידקים:
צלחות פטרי חד פעמיות מפלסטיק עגול/מרובע:
l חומר פוליסטירן עם שקיפות גבוהה (PS);
l המשטח חלק ושטוח, ואין עיוות אופטי של תאים תחת תצפית מיקרוסקופית;
l עיצוב הערמה מקל על הערימה והאחסון;
l עיקור אתילן תחמוצת (EO);
l עמידות בפני שחיקה וקורוזיה.
מקל חיסון חד פעמי מפלסטיק/לולאה:
חומר פוליסטירן (PS);
ללא זיהום, אנדוטוקסין, DNase, RNase ופירוגנים;
אריזה עצמאית עברה עיקור;
ביצוע משובח ומפרט מלא;
מפזר תאים חד פעמי מפלסטיק, מפזר חיידקים:
חומר פוליסטירן (PS);
ללא זיהום, אנדוטוקסין, DNase, RNase ופירוגנים;
עיצוב בצורת L, קל לשימוש;
שימוש חד פעמי, קל ונוח.
פלדת אל חלד / לוחיות מפרט סטרילי חד פעמי:
לוחית המפרט מנירוסטה עשויה מפלדת אל חלד, ולוחית המפרט החד פעמית עשויה מפוליפרופילן (PP) באיכות מזון.
ללא זיהום, אנדוטוקסין, DNase, RNase ופירוגנים;
אזור המריחה הוא סטנדרטי למהדרין
צד אחד של לוחית המפרט מצויד בידית, שקל לתפעול
אריזה בודדת סגורה סטרילית כדי למנוע זיהום משני של דגימה ושגיאות בתוצאות
שימוש חד פעמי כדי למנוע זיהום צולב ולהפחית עומס עבודה
מוזמן לשתף איתנו פעולה
בכנות
מייקל פנג
michael@bkmbio.com