איך לשמור על בריאות התאים

תנאים בסיסיים לתרבות תאים

1. מצע מתאים לתרבית תאים

מצע מתאים לתרבית תאים הוא אחד התנאים החשובים ביותר לצמיחת תאים וריבוי במבחנה. מצע התרבית לא רק מספק תזונה לתאים וחומרים בסיסיים לקידום צמיחת תאים ושגשוג, אלא גם מספק סביבת חיים לצמיחה ורבייה של תאים מתורבתים.

2. סרום איכותי

נכון להיום, רוב המדיה הסינתטית דורשת תוספת של סרום. סרום הוא אחד המרכיבים החשובים ביותר במדיום תרבית תאים, המכיל מגוון גורמי גדילה וחומרי תזונה נוספים הדרושים לצמיחת תאים.

3. טמפרטורת צמיחת תאים קבועה

כדי לשמור על צמיחה נמרצת של תאים מתורבתים, חייבת להיות טמפרטורה קבועה ומתאימה.

4. סביבת גז מתאימה

גז הוא אחד התנאים ההכרחיים להישרדותם של תאי יונקים, והגזים הנדרשים הם בעיקר חמצן ופחמן דו חמצני.

5. טמפרטורת תרבית תאים

כדי לשמור על צמיחה נמרצת של תאים מתורבתים, חייבת להיות טמפרטורה קבועה ומתאימה. לסוגים שונים של תאים יש דרישות שונות לטמפרטורת התרבית. הטמפרטורה הסטנדרטית לתרבית תאים אנושית היא 36.5 מעלות ± 0.5 מעלות. סטייה מטווח טמפרטורות זה תשפיע על חילוף החומרים התקין של התאים ואף תמות.

6. סביבת גז מתאימה

גז הוא אחד התנאים ההכרחיים להישרדות תרבית תאי יונקים, והגזים הנדרשים הם בעיקר חמצן ופחמן דו חמצני. חמצן משתתף במחזור החומצות הטריקרבוקסיליות, מייצר אנרגיה לצמיחת תאים וריבוי ומסנתז רכיבים שונים הדרושים לצמיחת תאים.

זיהום נפוץ של תרבית תאים

1. זיהום חיידקי

זיהום חיידקי הוא הנפוץ ביותר. ברגע שהפעולה מעט לא נכונה, היא תגרום לזיהום תאים. לאחר זיהום חיידקי, הוא יופיע כרצועות חול דקיקות שחורות כאשר נצפה תחת המיקרוסקופ. בצורת מוט וכו'. שנית, מצע התרבות הופך צהוב ועכור, וניתן לראות בבירור משקעים בצורת חול עדין בצלחת הפטרי, ומדי פעם יש ריח מוזר.

2. זיהום פטרייתי

תמיסת התרבית המזוהמת בפטריות היא שקופה ושקופה, לא כמו התפרצות גדולה של זיהום חיידקי, ולכן קשה לזהות אותה מוקדם. לפעמים זה נראה כמו חוט נימה מתחת למיקרוסקופ, לפעמים זה נראה כמו אלמוג, ולאט לאט יצמח חוט שחור דק מאוד. זה כשזה מאוחר מדי, קשה להציל את התאים.

3. זיהום עובש

בהתאם לזיהומים פטרייתיים, מכיוון שמצע התרבות ברור, קשה לזהות זיהום פטרייתי מוקדם, כאשר לרוב זה מאוחר מדי. זיהומים צפצופים הופיעו אט אט במצע התרבות, וניתן היה לראות אובייקטים צפים מסה חוטית מתחת למיקרוסקופ, כמו קטינים ברוח. תאים עדיין יכולים לגדול, אבל עם הזמן, התאים מתדרדרים ומפסיקים לגדול.

4. זיהום במיקופלזמה

מצע התרבות הופך עכור. לאחר שמיקופלזמה מדביקה את התאים, השינויים הציטופתיים אינם ברורים, אך מצב התא מחמיר והצמיחה מואטת. ייתכנו נקודות שחורות קטנות מתחת למיקרוסקופ, אך מצע התרבות בדרך כלל אינו עכור. לאחר מעבר התאים, הופיעו כתמים שחורים בין-תאיים, תאים שונו ואנו, ותאים רבים דמו לאפופטוזיס ונמק. בסופו של דבר, התאים צפו ומתו לחלוטין.

מניעת זיהום תאים

קביעת כללים ותקנות טובים יכולים לסייע רבות בהפחתת זיהום התאים. כולל מערכת גישה, נורמות תפעול ומערכת ניהול יומיומית.

מערכת גישה: כולל כוח אדם וחומרים. הצוות צריך לעבור הכשרה לפני שהם יכולים לפעול בעצמם, והם חייבים לעמוד בדרישות הלבישה לפני הכניסה למעבדה, כגון מעילים לבנים, שמלות בידוד, מסכות, כפפות וכו'. עבור הפריטים הדרושים, יש להקפיד על פריטים שאינם חד פעמיים מעוקר ומעוקר, ופריטים שנרכשו צריכים להירכש מערוצים קבועים ואמינים. יש לבדוק ולאמת תאים שנרכשו לאחרונה לפני השימוש.

מפרט תפעול: עדיף לגבש מפרט לפעולות שוטפות, ועל אנשי המעבדה לפעול לפי מפרט התפעול, שאינו ניתן לשינוי כאוות נפשו, וכן לטפח הרגלי הפעלה טובים לאנשי המעבדה. לדוגמה, לאחר מציצת קצה הפיפטה, הוא לא יוארך לתוך המדיום בפעם השנייה, וכמות מספקת של מדיום תישאב פעם אחת. בעת הוספת נוזל, יש להוסיף את הנוזל בתרחיף ככל האפשר, מה שיכול למנוע ביעילות זיהום מיקופלזמה וזיהום צולב של תאים. בנוסף, אם אפשר, הפעל רק קו תאים אחד בכל פעם, ועדיף מרווח זמן קטן בין התאים כדי למנוע זיהום צולב.

מערכת ניהול יומית: היא כוללת כללים ושיטות לשימוש, ניקוי ותחזוקה של איכות הסביבה וחומרים מתכלים, ריאגנטים וכו'. יש גם ניהול של צריכה, מלאי ורכש של ריאגנטים וחומרים מתכלים, כולל ניהול מלאי דו-מפלסי של דגימות תאים. למקורות הזיהום שלא קל למצוא, עדיף לערוך בדיקות קבועות, בעיקר זיהום מיקופלזמה וזיהום צולב תאים.

BKMAM Bio מספקת חומרים מתכלים מתאימים לתרבית תאים:

צלחות פטרי חד פעמיות מפלסטיק עגול/מרובע:

חומר פוליסטירן בשקיפות גבוהה (PS);

פני השטח חלקים ושטוחים, ואין עיוות אופטי של תאים בתצפית מיקרוסקופית;

עיצוב הערמה מקל על הערימה והאחסון;

עיקור אתילן אוקסיד (EO);

עמידות בפני שחיקה וקורוזיה.

טיפול דבק במנות תרבית תאים:

חומר פוליסטירן (PS);

עיקור קרן אלקטרונים, ללא פירוגן, ללא רעלן;

טיפול במשטח פלזמה ואקום, הידבקות מצוינת לתאים;

פני השטח חלקים ושטוחים, ואין עיוות אופטי של תאים בתצפית מיקרוסקופית;

עיצוב הניתן לערמה מקל על הערימה והאחסון.

לוחות תרבית תאים מפלסטיק:

חומר פוליסטירן (PS);

מתאים לתרבית תאים רגילה, סוג צלחת טיפול לא דביק;

ללא פירוגן, ללא רעלן, מעוקר;

אריזה עצמאית מסוג קריעה קלה, קלה לתפעול;

טיפול דבק בצלחות תרבית תאים:

חומר פוליסטירן (PS);

סוג צלחת טיפול נצמד (טיפול TC), מתאים להתרבות תאים דביקים;

ללא פירוגן, ללא רעלן, מעוקר;

אריזה עצמאית מסוג קריעה קלה, קלה לתפעול;

כולם תחתונים שטוחים.

טיפול דבק של צלוחיות תרבית תאים:

חומר פוליסטירן (PS);

עיקור קרן אלקטרונים, ללא פירוגן, ללא רעלן;

טיפול במשטח פלזמה ואקום, הידבקות מצוינת לתאים;

כיסוי נושם, המסייע להחלפת גזים ומונע מעבר של מיקרואורגניזמים.

קריוביאלים פנימיים/חיצוניים לספין:

100 אחוז חומר פוליפרופילן טהור (PP);

יכול לעמוד ב-15psi, עיקור של 121 מעלות;

דופן הצינור מעובה, ולגוף הצינור יש אבנית ושטח כתיבה;

יש חותם טבעת סיליקון בין חוט כיסוי הצינור לגוף הצינור כדי להבטיח אטימות;

ללא DNase, ללא RNase, ללא פירוגן, ללא אנדוטוקסין.